Клонирование и экспрессия в E. coli рекомбинантного белка VP1 вируса инфекционной анемии цыплят

М.П. Грудинин¹, кандидат биологических наук, руководитель отдела биотехнологии,

А.Б. Комиссаров¹, зав. лабораторией молекулярной вирусологии, А.З. Гусейнова, лаборант-исследователь лаборатории генной инженерии и экспрессии рекомбинантных белков, А.А. Шалджян¹, лаборант-исследователь лаборатории генной инженерии и экспрессии рекомбинантных белков, Я.А. Забродская¹, кандидат физико-математических наук, научный сотрудник лаборатории системной вирусологии, Д.Л. Жук³, магистр ветеринарных наук, В.М. Ковейкина, соискатель, А.С. Алиев³, доктор ветеринарных наук, профессор, руководитель отдела

¹ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России (197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова 15/17).

²УО Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия (210026, Республика Беларусь, г. Витебск, ул. 1-я Доватора 7/11).

³ООО «Биовет-К» (109382, Москва, Егорьевский пр-д, 2А стр.6).

Цель исследования. Получить рекомбинантный белок VP1 вируса инфекционной анемии цыплят (ИАЦ), способный специфически выявлять антитела к вирусу ИАЦ в сыворотках крови больных кур.

Материалы и методы. Клонирование фрагмента гена VP1 вируса инфекционной анемии цыплят проводили в экспрессионные плазмиды pET15b и pGEX-3T в рамках считывания полигистидиновой последовательности и глутатион-S-трансферазы, соответственно. Экспрессированные в штаммах E. coli Rosetta(DE3) рекомбинантные белки 6HIS-∆VP1 и GST-∆VP1 были очищены методом металл-аффинной хроматографии. Аминокислотную последовательность рекомбинантных белков подтверждали методом масс-спектрометрии. Специфичность взаимодействия рекомбинантных белков с поликлональными антителами определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Способность рекомбинантного белка 6HIS-∆VP1 к выявлению антител в полевых и сыворотках крови SPF-цыплят оценивали методом непрямого ИФА. Для контроля специфичности антигена использовали иммунные сыворотки птиц к вирусам инфекционного бронхита, ньюкаслской болезни, инфекционного ларинготрахеита, аденовирусной инфекции, Mycoplasma gallisepticum, а также отрицательную сыворотку крови кур.

Результаты. Был получен рекомбинантный белок VP1 вируса ИАЦ, содержащий полигистииновый тэг (6HIS-∆VP1). Было показано, что данный рекомбинантный белок способен специфически выявлять антитела к вирусу ИАЦ в сыворотках крови кур.

Заключение. Полученный рекомбинантный белок 6HIS-∆VP1 может быть использован для выявления антител к вирусу ИАЦ в сыворотке крови больных кур, а также может быть рассмотрен как потенциальный компонент вакцин против данного вируса.

Ключевые слова: клонирование, экспрессия, штаммы E. coli, рекомбинантный белок VP1, вирус инфекционной анемии, СПФ-цыплят, антигенная активность, ИФА.