Оценка клональности эпителиотропной Т-клеточной лимфомы собак разной анатомической локализации

Предпосылки. Полагают, что эпителиотропная кожная Т-клеточная лимфома собак (эКТКЛ) представляет собой заболевание, гомологичное фунгоидной гранулеме (ФГ) у человека. При ФГ у людей опухолевые клетки фенотипически соответствуют резидентным эффекторным Т-клеткам памяти, популяции, сохраняющейся в тканях длительное время без циркуляции. У собак с эКТКЛ часто появляются очаги в разных местах, что вызывает вопрос, происходит ли новообразование из одной субпопуляции Т-клеток или нет.
Цели. Описать перестройки гена антигенного рецептора лимфоцитов из кожи и крови собак с эКТКЛ, чтобы установить, идентичны ли клоны опухоли.
Животные. 14 собак с эКТКЛ.
Материалы и методы. Гистологическое и иммуногистохимическое исследование, ПЦР для обнаружения перестройки антигенного рецептора (PARR) Т-клеточного рецептора гамма (TRG) различных биоптатов кожи и крови.
Результаты. Все биоптаты кожи содержали неопластические лимфоциты, содержащие кластер дифференциации (CD)3. У отдельных собак все биоптаты кожи показали идентичные профили клональности TRG, что дает основания предполагать присутствие одного опухолевого клона во всех очагах. В крови соответствующий клон обнаружен у 6 из 14 собак, уникальный клон выявлен у 9 из 14 собак, и у 2 из 14 не было обнаружено клона.
Выводы. Эти данные показывают, что очаги эКТКЛ собак в нескольких локализациях содержат один клон опухоли, неопластические лимфоциты не остаются неподвижно в коже, а могут циркулировать в крови, в коже и крови можно обнаружить различающиеся клоны, и циркулирующие неопластические клетки не обязательно сопровождаются лимфоцитозом.
Ключевые слова: эпителиотропная кожная Т-клеточная лимфома, собаки, клональность опухоли, перестройка
гена антигенного рецептора лимфоцитов

Evaluation of clonality from multiple anatomic sites in canine epitheliotropic T cell lymphoma

M. Kelly Keating¹, Wayne S. Rosenkrantz¹, Stefan M. Keller², Peter F. Moore^2
1 Animal Dermatology Group, Inc, Tustin CA, USA.
² Department of Pathology, Microbiology, Immunology, School of Veterinary Medicine, University of California-Davis, Davis, CA, USA.

Background. Canine epitheliotropic cutaneous T-cell lymphoma (eCTCL) is thought to represent a disease homologue to human mycosis fungoides (MF). In human MF, neoplastic cells are phenotypically consistent with resident effector memory T cells, a population that remains for an extended period within tissue without circulating. Dogs with eCTCL often present with lesions in multiple locations, raising the question of whether the neoplasm is of the same T-cell subpopulation or not.
Objectives: To characterize the antigen receptor gene rearrangements of lymphocytes from skin and blood of dogs with eCTCL to determine if neoplastic clones are identical.
Animals. Fourteen dogs with eCTCL.
Materials and methods. Histological and immunohistochemical examination, and PCR for antigen receptor rearrangement (PARR) for T-cell receptor gamma (TRG) performed on multiple cutaneous biopsy samples and blood.
Results. All skin biopsies contained cluster of differentiation (CD)3-positive neoplastic lymphocytes. Within individual dogs, all skin biopsies revealed identical TRG clonality profiles, suggesting that the same neoplastic clone was present in all sites. In the blood, a matching clone was found in six of 14 dogs, a unique clone was observed in nine of 14 dogs, and no clone was detected in two of 14 dogs.
Conclusions. These findings show that canine eCTCL lesions in multiple locations harbour the same neoplastic clone, neoplastic lymphocytes do not remain fixed to the skin and instead can circulate via blood, differing clones can be identified in skin versus blood, and circulating neoplastic cells can be detected without lymphocytosis.
Keywords: epitheliotropic cutaneous T-cell lymphoma, dogs, tumor clonality, antigen receptor gene rearrangements of lymphocytes.

Введение
Эпителиотропная кожная Т-клеточная лимфома — неоднородная группа опухолевых заболеваний кожи у людей и собак.
Фунгоидная гранулема — самый распространенный подтип эКТКЛ у людей. ФГ проявляется эритематозными пятнами, которые могут прогрессировать до бляшек и опухолей, и гистологически характеризуется эпителиотропными инфильтратами атипичных лимфоцитов с разной степенью инфильтрации дермы [1].
Педжетоидный ретикулез — вариант ФГ с атипичными лимфоцитами, ограниченными эпителием.
Синдром Сезари — редкая форма кожной Т-клеточной лимфомы, характеризующаяся поражением кожи и лимфатических узлов и лейкемическим компонентом.
В целом, ФГ и ПР у людей считаются доброкачественными лимфомами, ограниченными кожей, которые обычно благоприятно отвечают на лечение, воздействующее на кожу, и часто характеризуются длительным и незаметным клиническим течением. Клиническое течение СС обычно агрессивное, он устойчив к различным способам лечения [1…4].
У собак описаны подтипы эКТКЛ, сходные с человеческим ФГ, ПР и СС, с различиями в клиническом течении и иммунофенотипе [5…7]. эКТКЛ собак обычно проявляется как многоочаговое заболевание с быстрым клиническим прогрессированием. Неопластические клетки при эКТКЛ собак представляют собой клетки (CD)8+ или CD4- CD8-, и значительный процент экспрессирует Т-клеточный рецептор (TCR) y5 [5, 8]. Это коррелирует с ФГ человека, при котором неопластические Т-клетки экспрессируют CD4 и TCR γδ [4]. Исторически у людей ФГ и СС считали вариантами одного заболевания; однако фенотипические характеристики, молекулярные профили и ответы на терапию дают основания полагать, что это отдельные заболевания, происходящие из разных субпопуляций эффекторных Т-клеток памяти [1, 2, 9].
Среди Т-клеток кожи выделяют циркулирующие и резидентные закрепляющиеся в тканях популяции [9]. Постоянные Т-клетки памяти (TRM) длительно сохраняются в коже, не рециркулируют и экспрессируют кожные аддрессины CCR4 и кожный лимфоцитарный антиген (CLA), и лишены других рецепторов хоминга [9, 10]. В противоположность этому, центральные Т-клетки памяти циркулируют между кровью и лимфатическими узлами, а также экспрессируют адрессины, обусловливающие хоминг в кожу, могут входить и рециркулировать через кожу. Неопластические клетки из ФГ человека обладают фенотипом тканевых клеток памяти, тогда как неопластические клетки пациентов с СС (в крови или коже) обладают фенотипом центральных клеток памяти [2, 10]. В целом клиническое течение у пациентов с указанными характеристиками отражает биологию данных субпопуляций Т-клеток памяти. Однако имеются некоторые несоответствия, например возникает вопрос, почему эКТКЛ обычно проявляется в нескольких анатомических локализациях, хотя полагают, что клетки TRM остаются закрепленными в коже.
Многие из доступных маркеров для описания характеристик Т-клеток у людей и мышей недоступны для использования в тканях собак. Это ограничивает возможности описания характеристик эКТКЛ собак. Однако данные о биологии эКТКЛ возможно получить с помощью ИГХ-методов с использованием маркеров и молекулярных инструментов, доступных для собак, прежде всего ПЦР для определения перестроек рецепторов (PARR), что позволяет определить клональные взаимоотношения клеток в разных анатомических участках...